單糖成分分析的主流檢測方法總結(jié)，整合自當前研究與實踐指南：

一、色譜分析法（主流技術(shù)）

高效液相色譜法（HPLC）?

原理?：基于單糖極性差異進行分離，常用氨基柱或糖專用柱（如SugarKS系列）。

衍生化必要性?：

聯(lián)用紫外/熒光檢測器（如PMP衍生化）適用中性/酸性多糖，檢出限低至μg/L；

聯(lián)用示差折光（RID）、蒸發(fā)光散射（ELSD）等檢測器無需衍生。

局限?：果糖等非還原糖難以檢測。

高效陰離子交換色譜-脈沖安培檢測法（HPAEC-PAD）?

優(yōu)勢?：無需衍生化，直接分離單糖（含酸性糖、氨基糖），靈敏度高、前處理簡單。

適用?：復雜樣品（如糖蛋白、植物多糖）的精確定量。

氣相色譜法（GC）?

流程?：單糖需衍生化為揮發(fā)性衍生物（如硅烷化）后分析。

適用?：中性單糖分析，分離度好；

局限?：不適用糖醛酸及熱不穩(wěn)定單糖，衍生步驟繁瑣。

薄層色譜法（TLC）?

特點?：操作簡便、成本低，常用于初步定性；

局限?：分離度低，重現(xiàn)性受溫濕度影響大。

二、質(zhì)譜與核磁共振技術(shù)

質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)?

GC-MS?：高分辨率定量，需衍生化；

LC-MS/MS?：適用于衍生化單糖的痕量檢測。

核磁共振（NMR）?

原理?：基于化學位移識別單糖結(jié)構(gòu)（如1H NMR、CSSF-TOCSY技術(shù)）；

優(yōu)勢?：無需水解/衍生化，可同時區(qū)分22種糖類；

局限?：設(shè)備昂貴，需專業(yè)操作。

三、生化檢測法

酶比色法（如GOD-POD）?

適用?：葡萄糖專項檢測（如血糖分析），特異性強、干擾少。

還原糖滴定法（如費林試劑法）?

原理?：利用還原糖與銅離子的氧化還原反應；

注意?：需嚴格控制溫度、滴定速度。

四、關(guān)鍵流程與注意事項

步驟? ?操作要點?

樣品前處理? 酸水解（HCl/TFA）釋放單糖，需優(yōu)化條件避免降解；多糖提取可選水提/醇沉法。

衍生化選擇? PMP衍生化適用多數(shù)單糖，但果糖檢測需換用其他方法；HPAEC-PAD無需衍生。

方法選擇? 簡單定性→TLC；高精度定量→HPAEC-PAD或HPLC-MS；快速篩查→酶法。

五、應用場景推薦

醫(yī)藥/質(zhì)檢?：HPLC-PMP（穩(wěn)定性好）或HPAEC-PAD（高效精準）；

食品分析?：酶比色法（快速）、GC-MS（揮發(fā)性糖）；

科研解析?：NMR（結(jié)構(gòu)鑒定）、HPAEC-PAD（微量組分）。